Western blotting蛋白样品的制备（蛋白抽提）
1、 培养细胞蛋白样品的制备：
（1） 细胞培养至 80%左右密度时，以含 0.05%胰蛋白酶（AR1007）消化或经细胞
刮处理，细胞经预冷的 PBS(AR0030)漂洗两次，3000 g/min 离心 2-3 分钟。去
除上清，向沉淀中加入 5-7 倍沉淀体积的博士德培养细胞总蛋白提取试剂
（AR0103），反复吹打混匀。
（2） 若有粘稠物存在可用超声细胞破碎仪超声处理，超声时间为 2 秒，间歇 2 秒，
功率为 100-120 瓦，至溶液无粘稠为止。处理完后置冰上裂解 4-5 小时。
（3） 再次超声处理至无粘稠，10000 g/min 离心 10min。弃上层脂类和下层细胞碎
片，取中层蛋白溶液，加入等体积的博士德 2X 蛋白上样缓冲液(AR0131)或 1/4
体积 5X 蛋白上样缓冲液(AR1112)，混匀，样品置 100℃水浴箱中变性 5 分钟。
至此样品制备完成（样品可立即使用，也可以分装冻存。-20℃存放的样品可
稳定维持数月，4℃可保存 1-2 星期）。