FADS1基因在高甘油三酯血症大鼠模型中表达及甲基化状态研究
通过观察FADS1在高甘油三酯血症大鼠肝组织、BRL-3A肝细胞中表达水平及其Cp G岛甲基化状态,探讨FADS1在高甘油三酯血症发生、发展中的作用。方法:1、36只雄性SD大鼠,普通饲料适应性喂养1周后随机分为对照组和高血脂组,分别给予普通饲料及高脂饲料喂养,喂养3-5周后测血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白,建立高甘油三酯血症大鼠模型。再选择合适浓度的医用脂肪乳诱导大鼠肝细胞BRL-3A细胞脂变,检测细胞中总胆固醇、甘油三酯含量,建立高脂细胞模型,并利用5-Aza-Cd R处理高脂组细胞。2、利用荧光实时定量PCR检测大鼠肝组织及BRL-3A细胞FADS1 m RNA的表达,酶联免疫吸附试验检测大鼠血清及BRL-3A细胞上清液中FADS1蛋白的表达情况。3、提取大鼠肝脏组织中DNA后,经转化后行PCR扩增目的基因,并用克隆测序检测FADS1基因甲基化水平。4、将含有目的基因的质粒使用甲基化试剂Sss I处理及未处理后,分别转染至BRL-3A细胞中,利用荧光素酶报告基因载体系统明确甲基化对FADS1表达的影响。结果:1、高甘油三酯血症组大鼠血清及高脂BRL-3A细胞中甘油三酯浓度均高于对照组,差异具有统计学意义。2、高甘油三酯血症组大鼠肝组织及高脂BRL-3A细胞中FADS1 m RNA及蛋白表达均低于对照组,而5-Aza-Cd R处理高脂BRL-3A细胞后,FADS1 m RNA及蛋白表达高于高脂组,差异均有统计学意义。3、FADS1启动子区16个甲基化岛共6个检测位点中,高脂组甲基化水平高于对照组,差异均有统计学意义,并且甲基化水平与甘油三酯浓度呈正相关性。4、与甲基化试剂Sss I未处理组相比,处理组荧光酶活性显著降低,差异具有统计学意义,表明FADS1启动子区甲基化抑制了其基因的表达。结论:1、本研究利用高脂饲料喂养雄性SD大鼠,成功建立高甘油三酯血症动物模型;利用医用脂肪乳成功诱导BRL-3A细胞脂变,建立体外模拟高甘油三酯血症肝细胞模型,且浓度为6%的医用脂肪乳为最佳诱导浓度。2、在高甘油三酯血症大鼠肝组织及脂变BRL-3A细胞中,FADS1基因表达量降低,且甲基化水平高于对照组,FADS1基因启动子区甲基化可能参与了高甘油三酯血症发病过程。