选购ELISA试剂盒的四个要素

ELISA试剂盒在试验室现已相当普及，绝大多数ELISA试剂盒都是用于检查不知道样本中抗原的浓度。用试剂盒当然比自个渐渐摸条件快得多，ELISA试剂盒不仅能够让试验更便利，往往还愈加精确。现在市面上的ELISA试剂盒既有国产也有进口，数量繁复令人眼花缭乱，怎样才能选出最适用的商品呢？首要当然得依据咱们所要检查的分子进行检查，除此以外也还有一些需求加以考量的要素，本文就来为您介绍一二。
 
1. 穿插反响
假如抗体间发生冲突或穿插反响就会影响全部试验的特异性。其间抗体来历所带来的兼容性即是穿插反响的一个要素。虽然现在采购源自指定动物的抗体越来越简单，咱们仍有必要承认一下是否会发生穿插反响的疑问。在用双抗夹心法进行ELISA检查时，检查用的二抗有必要特异性关于检查一抗，而不能与捕获抗体起反响。假如检查用二抗与捕获抗体联系，试验特异性就会大打折扣。一般咱们选用源自不一样宿主的捕获抗体和检查一抗，来防止上述疑问。
与此同时，了解试剂盒中供给的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），以免这些buffer富含可能影响抗原抗体相互作用的组分，使检查成果收到影响。
 
2. 检查办法
现在检查ELISA试剂盒有很多路径，咱们能够依据自个的偏好进行挑选。一般ELISA检查的是酶促反响的可溶性产物，抗体上联系有相应的酶（例如一般运用的辣根过氧化物酶HRP），而反响系统中增加有相应的底物（如3，3-二氨基联苯胺DAB）。这种酶促反响生成具有特征性的色彩，能够通过分光光度计进行检查，碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶能够联系在一抗上，也能够联系在二抗上，还能够运用链霉亲和素符号的酶与亲和素符号的一抗联系。此外ELISA的成果检查还包含放射性检查、荧光检查、化学发光或显色法检查等。
 
3. 试验类型
ELISA试剂盒有多种类型，不过它们都有一个一起特点，即是进行抗原捕获。一般捕获方式包含将抗原吸附到微孔板或许用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑驳ELISPOT是两种特殊的类型，In-cell ELISA需求将微孔板中培育的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检查。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot，先在带膜的微孔板中培育细胞，然后在膜上检查细胞排泄的抗原构成斑驳。此外，咱们还需求依据自身需求挑选96孔板或是384孔板进行ELISA试验。
一般大家运用双抗夹心法进行ELISA试验，双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检查抗体之间，这种办法既活络又有用，受到了很多研究者的喜爱。不过有时候双抗夹心法并不是最好挑选，例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着，又或许抗体只有一个抗体联系位点。在上述情况下，竞赛性ELISA就更为适用，这种办法是选用带符号的纯化抗原与样本中无符号的抗原进行竞赛，以联系捕获抗体。
 
4. 抗体类型
单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA试剂盒实验，实际上有时候二者联系效果非常好。例如，关于双抗夹心法而言，用多抗进行捕获而单抗进行检查有时更有协助。多抗能够确保捕获一切抗原，随后单抗再特异性检查具有特定抗原表位的抗原。
=双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检查抗体（不论多抗仍是单抗）的配对很有考究。咱们不希望捕获抗体与检查抗体竞赛抗原上的同一位点，为此咱们就需求确保捕获抗体和检查抗体所识别的抗原表位不存在堆叠。假如捕获抗体和检查抗体之间发生了冲突，就会对试验成果发生较大影响。要防止这一疑问，咱们能够挑选采购“matched pair”的捕获/检查抗体对，这些打包在一起的抗体是商家通过验证才引荐的好组合。