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ELISA试剂盒试验原理解析

发布时间:2019-08-12 15:07 |  点击次数:

ELISA试剂盒试验原理解析

ELISA技能流程ELISA试剂盒的根底是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶符号。结合在固相载体外表的抗原或抗体仍坚持其免疫学活性,酶符号的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,ELISA试剂盒受检标本(测定其间的抗体或抗原)与固相载体外表的抗原或抗体起反响。用洗刷的办法使固相载体上构成的抗原抗体复合物与液体中的别的物质分隔。再参加酶符号的抗原或抗体,也经过反响而结合在固相载体上。此刻固相上的酶量与标本中受检物质的量呈必定的份额。参加酶反响的底物后,底物被酶催化成为有色产品,产品的量与标本中受检物质的量直接有关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。因为酶的催化功率很高,间接地扩大了免疫反响的结果,使测定办法到达很高的灵敏度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
ELISA试剂盒构成构造:
1、 血清:操作过程中防止任何细胞影响。运用不含热原和内毒素的试管。搜集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞敏捷小心肠别离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检查。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 安排匀浆:将安排参加适当盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保留:如果样品不当即运用,应将其分红小有些-70℃保留,防止重复冷冻。尽可能的不要运用溶血或高血脂血。如果血清中很多颗粒,检查前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热冻结。应在室温下冻结并确保样品均匀地充沛冻结。
ELISA试剂盒操作注意事项
1.试剂应按标签阐明书贮存,运用前康复到室温。稀稀往后的规范品应丢掉,不行保留。
2.试验中不必的板条应当即放回包装袋中,密封保留,防止蜕变。
3.不必的其它试剂应包装好或盖好。不相同批号的试剂不要混用。保质前运用。
4.运用一次性的吸头防止穿插污染,汲取停止液和底物A、B液时,防止运用带金属有些的加样器。
5.运用洁净的塑料容器配置洗刷液。运用前充沛混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗刷酶标板时应充沛拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反响孔中吸水。
7.底物A应蒸发,防止长期翻开盖子。底物B对光灵敏,防止长期露出于光下。防止用手触摸,有毒。试验完成后应当即读取OD值。
8.参加试剂的次序应一致,以确保一切反响板孔温育的时刻相同。
9.依照阐明书中标明的时刻、加液的量及次序进行温育操作。